Spheroid Generation in Microcavities

Dieses Videotutorial zeigt einen praxisnahen Workflow zur standardisierten Generierung von 3D‑Sphäroiden in Mikrokavitäten unter Verwendung von CaviSphere® MicroSphere‑PC‑Folien in CellCrown™‑Inserts. Das Protokoll basiert auf der langjährigen Erfahrung der Arbeitsgruppe „3D Zellkultursysteme“ am Institut für Funktionelle Grenzflächen des Karlsruher Instituts für Technologie (KIT), die CaviSphere®‑Mikrokavitäten in verschiedenen 3D‑Zellkultur- und Organoidmodellen einsetzt und dafür standardisierte Protokolle entwickelt hat. Schritt für Schritt werden Vorbereitung und Desinfektion der zweiteiligen Inserts und (Sensor-)Arrays mit Natriumazid, Wasser und 80 % Isopropanol demonstriert, einschließlich der Entfernung von Luftblasen aus den Mikrokavitäten. ... mehrAnschließend wird die korrekte Orientierung und Montage der CaviSphere®‑Folien im CellCrown™ gezeigt, gefolgt von der Beschichtung der Mikrokavitäten (z. B. mit BIOFLOAT™, alternativ Pluronic oder Kollagen). Das Video erläutert das Befüllen mit Medium, wiederholte Zentrifugation zur Blasenentfernung, das Aufbringen der Zellsuspension und die Sedimentation der Zellen in die Mikrokavitäten. Bereits nach 24 Stunden lässt sich die Sphäroidbildung beobachten. Das Tutorial unterstützt Forschende dabei, reproduzierbare 3D‑Sphäroide im 12‑Well‑Format zu erzeugen und CaviSphere®‑Folien sicher in bestehende Zellkultur- und Assay‑Workflows zu integrieren.

This video tutorial presents a practical workflow for standardized 3D spheroid generation in microcavities using CaviSphere® MicroSphere‑PC sheets in two‑piece CellCrown™ inserts. The protocol is based on the long‑standing experience of the “3D Cell Culture Systems” group at the Institute of Functional Interfaces, Karlsruhe Institute of Technology (KIT), which applies CaviSphere® microcavities in various 3D cell culture and organoid models and has developed standardized procedures for these systems. The tutorial demonstrates stepwise preparation and disinfection of inserts and (sensor) arrays with sodium azide, water and 80% isopropanol, including removal of air bubbles from the microcavities. ... mehrIt shows the correct orientation and assembly of the CaviSphere® sheets in the CellCrown™, followed by coating of the microcavities (using BIOFLOAT™ as an example, with Pluronic or collagen as alternatives). Pre‑filling with culture medium, repeated centrifugation to eliminate residual bubbles, careful removal of medium, and subsequent seeding and sedimentation of cells into the microcavities are explained in detail. Clear spheroid formation can typically be observed after 24 hours. The procedure enables researchers to generate highly reproducible 3D spheroids in a 12‑well plate format and to integrate CaviSphere® sheets safely and efficiently into existing cell culture and assay workflows.